Интенсивная терапия новорожденных

Значение сетодов ИФА и ПЦР и их место в лабораторной специфической диагностике герпесвирусов.

А.В. Сычев, М.С. Ефимов, Т.Б. Сычева, Ж.Л. Чабаидзе, З.М. Стригалева,
Н.И. Ахмина, Э.Д. Антипова

ООО "КОМПАНИЯ "БИОКОМ" г. Москва, РМАПО кафедра неонаталогии, г. Москва, Родильный дом № 27, г. Москва.

С целью выяснения диагностической значимости использования современных высокочувствительных методов ИФА и ПЦР в лабораторной диагностике герпесвирусов проведено клинико-лабораторное обследование 346 первичных доноров крови (в т.ч. 142 женщины и 204 мужчины), 152 женщин, родивших детей с перинатальной паталогией, 94 женщин, родивших здоровых детей. Возраст обследованных составлял 18-50 лет. Сформировано 3 группы женщин. Из них в первую группу вошли 152 женщины, родившие детей с признаками внутриутробного инфицирования, во вторую группу - 94 женщины, родившие здоровых детей, третью группу составили 142 женщины - первичные доноры крови. Всего 592 человека обследованы на наличие в слюне, моче, сыворотке крови специфических герпесвирусных DNA методом ПЦР фирмы "БИОКОМ", Россия. Помимо этого в сыворотке крови у них определяли anti-CMV IgG, anti -EBV IgG, anti -HSV I\II методом ИФА фирмы "Abbott", США; "Roche", Швейцария; "Organon Tekhnika", Голландия.

На основании проведенных исследований установлено, что частота обнаружения антител была одинаковой как в группе первичных доноров крови, так и среди женщин во всех трех группах и колебалась от 91.5% до 94.1% для anti-CMV IgG, от 87.2% до 93.7% для anti-HSVI/II, от 90.4% до 95.4% для anti-EBV IgG (табл. 1; рис.1).

Полученные данные индикации специфических герпесвирусных IgG указывают на чрезвычайно широкую циркуляцию anti-CMV IgG, anti-HSVI/II, anti-EBV IgG в сыворотке крови различных групп здорового населения г. Москвы.

Исследования DNA герпесвирусов в слюне, моче, сыворотке крови первичных доноров крови позволили установить экскрецию DNA CMV у 29.8% лиц, DNA HSVI/II - у 31.8% обследуемых, DNA EBV - в 38.1% случаев (рис.1). При этом экскреция DNA герпесвирусов у доноров в 96.4 - 97.7 % случаях сочеталась с циркуляцией в сыворотке крови соответствующих anti-CMV IgG, anti-EBV IgG, anti-HSVI/II.

Аналогичные результаты обнаружения DNA CMV, DNA HSVI/II, DNA EBV зарегистрированы и среди женщин в первой и третьей группах - 26.9%, 36.2%, 39.5% и 23.2%, 26.8%, 21.8% соответственно (рис.2).

Иная картина имела место во второй группе женщин, родивших здоровых детей. Установлено, что частота экскреции DNA CMV, DNA HSVI/II, DNA EBV в слюне, моче, сыворотке крови среди 94 женщин этой группы была достоверно ниже, чем у первичных доноров крови и женщин, родивших детей с признаками внутриутробного инфицирования и составила соответственно 4.3%, 1.1%, 7.4% (р< 0.05) (рис.2).

При этом, необходимо подчеркнуть, что обнаружение DNA герпесвирусов у женщин I и II групп во всех (100%) случаях, а у первичных доноров крови в 96.4-97.7% случаях сочеталось с наличием в сыворотке крови соответствующих anti-CMV IgG, anti-HSVI/II, anti-EBV IgG. Результаты проведенных исследований обнаружения специфических герпесвирусных иммуноглобулинов IgG и DNA в слюне, моче, сыворотке крови убедительно свидетельствуют, что циркулирующие в сыворотке крови anti-CMV IgG, anti-HSVI/II, anti-EBV IgG не отражают в полной мере состояние инфицирования герпесвирусами, а лишь указывают на состоявшуюся втечение жизни человека встречу с вирусом. Это также подтверждается ранее опубликованными данными, указывающими на протективную способность этих антител от заражения. Вместе с этим экскреция DNA герпесвирусов в слюне, в моче, в крови обусловлена их активной репликацией и указывает на состояние инфицирования человека вирусом.

Результаты обнаружения DNA CMV, DNA HSVI/II, DNA EBV в слюне, моче, сыворотке крови позволили документировать различные варианты инфицирования герпесвирусами (табл.2). Так среди первичных доноров крови в 32.7% случаев имело место моноинфицирование, в т.ч. у 4.9% лиц зарегистрировано инфицирование вирусом CMV, у 11.3% - вирусом HSVI/II, и у 16.5% - вирусом EBV. При этом значительно чаще имело место микстинфицирование герпесвирусами - в 25.1% случаев.

Принципиально важными являются результаты обнаружения DNA CMV, DNA HSVI/II, DNA EBV только в сыворотке крови. Установлено, что среди 346 первичных доноров крови частота обнаружения DNA CMV в крови составила 5.8%, наличие DNA HSVI/II выявлено у 9.0% лиц, а экскреция в крови DNA EBV отмечена у 5.5% доноров. (табл.3)

При этом в 84,0 - 87,0% случаев DNA герпесвирусов обнаружены на фоне циркулирующих специфических антител класса IgG (рис.3).

У оставшихся 13,0 - 16,0 % лиц документирована только экскреция DNA герпесвирусов.

Полученные нами данные указывают на возможность заражения герпесвирусами реципиентов крови и ее компонентов.

Таблица 1

Частота обнаружения Anti-CMV IgG, Anti-HSV I\II, Anti-EBV I gG у женщин г. Москвы

Группы

Обнаружены

Anti-CMV IgG Anti-HSV I\II Anti-EBV I gG

n абс. % абс. % абс.
%

I группа n=152
женщины, родившие детей с перинаталь-ной патологией

143

94.1

142

93.4

145

95.4

II группа n=94
женщины, родившие здоровых детей
86 91.5 82 87.2 85 90.4

III группа n=142
женщины - первичные доноры крови
131 92.2 133 93.7 132 93.0

Таблица 2

ВАРИАНТЫ ИНФИЦИРОВАНИЯ ГЕРПЕСВИРУСАМИ ПЕРВИЧНЫХ ДОНОРОВ КРОВИ г.МОСКВЫ.

Число обследованных
Число инфицированных герпесвирусами
В том числе

Моноинфицирование

микстинфици-

рование

346 200
CMV

17

4.9%
HSVI\II
39

11.3%
EBV
57

16.5%
87
25.1%

100% 57.8%
113

32.7%

Таблица 3

ОБНАРУЖЕНИЕ DNA ГЕРПЕСВИРУСОВ В СЫВОРОТКЕ КРОВИ ПЕРВИЧНЫХ ДОНОРОВ г.МОСКВЫ.

ДОНОРЫ ОБНАРУЖЕНЫ
В КРОВИ

КРОВИ DNA- CMV
DNA-HSV I\II

DNA-EBV

(N)
Абс

%

Абс

%

Абс

%

346
20

5.8

31

9.0

19

5.5